血涂片與血液分析儀.doc

血涂片與血液分析儀劉鑄，蘇紫云（黑龍江省牡丹江師范學(xué)院生物系157012）牛英（黑龍江省寧安市朝鮮族中學(xué)157000）摘要經(jīng)典血涂片鏡檢與先進(jìn)的血液分析儀在血液研究和疾病診斷中各自發(fā)揮著重要的作用。本文對(duì)血涂片的制作過程、血涂片在血液研究和檢驗(yàn)中的地位、血液分析儀的發(fā)展歷史和血液分析儀檢測(cè)優(yōu)勢(shì)進(jìn)行綜述，科學(xué)評(píng)價(jià)了血液分析儀的作用，積極鼓勵(lì)中學(xué)生物課和高校生物及醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)開設(shè)好血涂片制作與觀察技術(shù)這門實(shí)驗(yàn)課。綜述內(nèi)容期望為廣大生物教師和血液研究人員提供科學(xué)的借鑒。關(guān)鍵詞血涂片血液分析儀血液疾病診斷1595年，荷蘭的磨鏡師詹森（Jason）用兩塊凸透鏡制成了第一架簡(jiǎn)陋的復(fù)式顯微鏡。1658年意大利人馬爾皮基（Malpighi）在顯微鏡下首先觀察了紅細(xì)胞，200年后人們開始進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，隨后開始制作血涂片觀察各種血細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行計(jì)數(shù)。在血涂片基礎(chǔ)上，期望儀器代替人工進(jìn)行檢測(cè)，1953年，第一臺(tái)血液分析儀（AHA）由Coulter發(fā)明問世。這一系列的科學(xué)進(jìn)步使人們更好的認(rèn)識(shí)了血液的組分，并意識(shí)到許多疾病的發(fā)生與血液中某些細(xì)胞數(shù)量、形狀的變化有著密切關(guān)系，同時(shí)也為動(dòng)物血液研究提供了良好途徑1。近年來(lái)，隨著科技進(jìn)步及計(jì)算機(jī)的廣泛使用，醫(yī)院和生物實(shí)驗(yàn)室大量引進(jìn)了一些自動(dòng)化血液分析儀，使實(shí)驗(yàn)室對(duì)血液標(biāo)本的處理更加簡(jiǎn)單、快速。有效的減輕了檢驗(yàn)人員的工作量，提高了工作效率2。然而，擁有這樣的先進(jìn)儀器，并不是說目前中學(xué)生物課和高校生物及醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)開設(shè)的血涂片制作與觀察是落伍的技術(shù)，血涂片鏡檢永遠(yuǎn)是血液研究和疾病診斷的第一窗口，提供的信息在諸多方面是目前血液分析儀不能滿足的。本文對(duì)血涂片和血液分析儀的研究狀況進(jìn)行綜述，期望為廣大生物教師和血液研究人員提供科學(xué)的借鑒。1血涂片1.1血涂片的制作過程血涂片的制作與觀察技術(shù)出現(xiàn)較早，多年的教學(xué)、科研和醫(yī)療診斷已經(jīng)使得血涂片的制作與觀察在多方面得到了改進(jìn)，過程主要可以分為三大步：取血：用醫(yī)用消毒酒精及棉球消毒采血部位，人左手無(wú)名指指尖內(nèi)側(cè)是采血的最佳部位，不僅可以減少疼痛而且采血方便。采血時(shí)，用采血針迅速刺破皮膚，使血液自然流出，勿擠。醫(yī)用棉拭去第一滴血后，選用第二滴血制片。制片：一般認(rèn)為血滴距邊緣1.5cm左右，血量為15-20l，此量推出的血涂片大小，厚薄較為適宜。將某一載玻片置于血滴前方，向后移動(dòng)輕輕接觸血滴。使之在兩玻片之間展開，形成一條血線。推片時(shí)形成3035向另一端平穩(wěn)的一次推出，涂片推好之后，使之迅速自然干燥。再將染液染色一分鐘，一般采用瑞士染液（伊紅亞甲基藍(lán)）。觀察：光學(xué)顯微鏡下的鏡檢可將血液組分進(jìn)行如下分類：a)紅細(xì)胞：數(shù)量最多，淡紅色，無(wú)核，圓形細(xì)胞。b)顆粒性白細(xì)胞（簡(jiǎn)稱粒細(xì)胞）：嗜中性顆粒白細(xì)胞，是白細(xì)胞中數(shù)量最多的，體積略大于紅細(xì)胞，細(xì)胞核染成紫色葉狀，一般2-5葉；嗜酸性顆粒白細(xì)胞，較中性細(xì)胞大，數(shù)量少，細(xì)胞核染成紫色葉狀，通常為兩葉，胞質(zhì)中充滿紅色圓形顆粒；嗜堿性顆粒白細(xì)胞，數(shù)目很少，在涂片上較難找到，核不規(guī)則，分2-3葉，也被染成紫色，細(xì)胞質(zhì)中含有許多大小不等，被染成紫色的嗜堿性顆粒。c)無(wú)顆粒白細(xì)胞：淋巴細(xì)胞，可分為大中小三類淋巴細(xì)胞。細(xì)胞質(zhì)少，核大。其中小淋巴細(xì)胞與紅細(xì)胞大小相似，細(xì)胞核呈卵圓形，染成深藍(lán)紫色；單核細(xì)胞：為血液中最大的細(xì)胞。核呈卵圓形或馬蹄型，染色淡，為灰藍(lán)色，胞質(zhì)不清明。d)血小板，不規(guī)則淡藍(lán)色小體，內(nèi)有藍(lán)色顆粒，常聚集成群。作者簡(jiǎn)介：1979、男、講師、在讀博士、從事生物教學(xué)及動(dòng)物學(xué)研究。1.2血涂片在血液研究和檢驗(yàn)中的特點(diǎn)血涂片鏡檢不僅廉價(jià)，直觀，而且技術(shù)要求不是很高，一般技術(shù)人員便可很好的掌握。血涂片不但能夠提供血液分析儀提供的基本數(shù)據(jù)，而且隨著對(duì)血涂片的深入研究，目前，已經(jīng)可以提供較為全面詳實(shí)的多方面血液資料，尤其當(dāng)血液分析儀提供的某些數(shù)據(jù)異常時(shí)，血涂片是一種必要的檢查手段。在以下幾方面，血涂片鏡檢發(fā)揮著舉足輕重的作用：血涂片鏡檢可以直接檢查人體寄生蟲3，如巴貝蟲、非洲錐蟲、黑熱病原蟲、絲蟲病和弓形蟲病。在不規(guī)則發(fā)熱瘧疾患者的診斷中，血涂片鏡檢可以直接查見瘧原蟲而確診。血涂片鏡檢對(duì)血液感染性疾病的研究和檢驗(yàn)有一定價(jià)值，通過研究發(fā)現(xiàn)，可以在血涂片中觀察到金黃色葡萄球菌，白色念珠菌、軍團(tuán)菌等4-6，為霉菌感染和菌血癥提供了寶貴的研究和診斷資料。血涂片鏡檢在貧血檢測(cè)中發(fā)揮著巨大作用7，如大細(xì)胞性貧血，小細(xì)胞性貧血，溶血性貧血及鐮刀型細(xì)胞貧血。盡管隨著科學(xué)發(fā)展一些檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)涉足貧血檢測(cè)，然而，對(duì)于Howell-Jolly小體、點(diǎn)彩紅細(xì)胞等方面的貧血檢測(cè)血涂片發(fā)揮著不可替代的作用。血涂片鏡檢對(duì)白細(xì)胞異常性疾病的診斷具有價(jià)值。如對(duì)白血病、淋巴瘤或骨髓衰竭等疾病檢測(cè)有一定的價(jià)值8。血涂片鏡檢對(duì)血小板異常有一定的檢測(cè)意義，如小凝塊、血小板聚集、血小板衛(wèi)星、異常大血小板和血小板數(shù)量異常方面的檢測(cè)結(jié)果盡管不能完全確診但對(duì)疾病的研究和診斷有重要的參考價(jià)值。血涂片鏡檢在當(dāng)血液細(xì)胞分析儀提供的某些數(shù)據(jù)異常時(shí)發(fā)揮著巨大作用9，2005年7月，國(guó)際血液學(xué)實(shí)驗(yàn)室（InternationalSocietyforLaboratoryHematology,ISIH）提出了由美、加、英、澳等6個(gè)國(guó)家19個(gè)實(shí)驗(yàn)室共同制定的血液分析儀檢測(cè)后血涂片復(fù)檢的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)10。血涂片鏡檢在動(dòng)物廣譜的血液研究是唯一選擇。因?yàn)槟壳把?xì)胞分析儀的設(shè)計(jì)主要為人類服務(wù)，哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞無(wú)核，但是兩棲類、爬行類和鳥類等紅細(xì)胞都有核，從適用范圍上其它技術(shù)目前無(wú)法替代。2血液分析儀2.1血液分析儀的發(fā)展歷史1953年，美國(guó)人庫(kù)爾特將發(fā)現(xiàn)微小粒子通過特殊小孔時(shí)可產(chǎn)生電阻變化這一現(xiàn)象的庫(kù)爾特原理（Coulterprinciple）引用到血液細(xì)胞計(jì)數(shù)上，獲得發(fā)明專利。1958年，以Coulter命名的專門從事顆粒性測(cè)量和計(jì)數(shù)的庫(kù)爾特電子（coulterElectronics）公司成立。此后，歐洲和日本也開始了血液細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的開發(fā)與研制。1962年，我國(guó)第一臺(tái)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在上海研制成功。70年代，血小板計(jì)數(shù)儀問世。1974年，有了具初步白細(xì)胞分類功能的白細(xì)胞分析儀（HEMALOGD）。90年代，開發(fā)出了可對(duì)網(wǎng)狀紅細(xì)胞（RET）進(jìn)行技術(shù)的血細(xì)胞分析儀2。經(jīng)過半個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展，以前的只能進(jìn)行簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)紅細(xì)胞（RBC）和白細(xì)胞（WBC）的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(BloodCellCounter)，發(fā)展為后來(lái)具有了血紅蛋白（HBG）、血小板（PLT）、紅細(xì)胞壓積（HCT）等參數(shù)的先進(jìn)儀器，目前，很多血液分析儀已經(jīng)向體積分布寬度、異常血細(xì)胞形態(tài)分類等方面進(jìn)軍，甚至有的儀器可以提供40-50種測(cè)量或計(jì)算參數(shù)。由于這些儀器可以通過血細(xì)胞提供更多的參數(shù)進(jìn)行聯(lián)合測(cè)定和分析，因此，一些科學(xué)家將這類儀器的名字稱為血液細(xì)胞分析儀（HematologyAnalyzer），但多數(shù)學(xué)者和應(yīng)用者還將其統(tǒng)稱為血液分析儀。2.2血液分析儀檢測(cè)優(yōu)勢(shì)現(xiàn)在的血細(xì)胞分析儀采用了最新的電子、光學(xué)、化學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，目前在諸多方面顯現(xiàn)出自身前所未有的優(yōu)勢(shì)：功能擴(kuò)大，增加網(wǎng)織紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分析到目前已經(jīng)有幼稚細(xì)胞分析和有核紅細(xì)胞分析功能11，甚至具有血液細(xì)胞中的某些寄生蟲進(jìn)行提示的功能。有些新的功能與參數(shù)目前只限定在實(shí)驗(yàn)室中研究，還未能得到廣泛應(yīng)用。方便快捷，新型的血液分析儀具有自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)。在操作方便的基礎(chǔ)上，血液分析儀不斷增加檢測(cè)速度，目前已經(jīng)可以達(dá)到每小時(shí)檢測(cè)150個(gè)樣本。方便快捷的操作使得血液分析儀在對(duì)大量樣本檢測(cè)上顯示出了明顯優(yōu)勢(shì)。技術(shù)更新，技術(shù)更新最突出的是細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)的更新，從最初的電阻抗法到檢測(cè)的激光散射、細(xì)胞化學(xué)(過氧化酶和嗜堿細(xì)胞染色)、特殊細(xì)胞染色技術(shù)、比色法和多角度偏振光散射等技術(shù)，可以說發(fā)生了翻天覆地的變化12。流水線化，流水線化是將血液常規(guī)分析中的所有步驟和項(xiàng)目進(jìn)行系統(tǒng)性聯(lián)合，將血液常規(guī)分析、網(wǎng)織紅細(xì)胞分析、血片的制備(選擇、涂片、編號(hào)、染色、干燥)等系列步驟通過儀器自動(dòng)完成。流水線化是血液分析儀多年來(lái)努力的方向，目前終于在國(guó)外一些資金雄厚的實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)室得以實(shí)現(xiàn)，為將來(lái)廣泛應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。綜上所述，經(jīng)典血涂片鏡檢與先進(jìn)的血液分析儀在血液研究和疾病診斷中各自發(fā)揮著重要的作用。血液分析儀在血液研究和血液常規(guī)分析等方面表現(xiàn)出多方面優(yōu)勢(shì)，而且有著良好的發(fā)展前景，因此，對(duì)于動(dòng)物血液的基礎(chǔ)指標(biāo)測(cè)定和疾病的常規(guī)檢測(cè)應(yīng)該大量應(yīng)用血液分析儀，可以作為血細(xì)胞分析的一種過篩手段。然而，儀器分析并不能完全取代人工分類13，特別目前血液分析儀與血涂片相比還有諸多問題有待進(jìn)一步發(fā)展解決，各國(guó)很多專家認(rèn)為經(jīng)血液分析儀檢查過的樣本需要進(jìn)行血涂片復(fù)檢。因此，鼓勵(lì)中學(xué)生物課和高校生物及醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)開設(shè)好血涂片制作與觀察技術(shù)這門實(shí)驗(yàn)課。無(wú)論是血液分析儀還是血涂片，只有通過實(shí)驗(yàn)、實(shí)踐不斷提高知識(shí)水平和實(shí)驗(yàn)技能才能讓其發(fā)揮出其更科學(xué)的作用。主要參考文獻(xiàn)1GulatiGL,HyunBH,AshtonJK.Hematologyinstrumentsforclinicallaboratories,LabMed,1984,15:395.2TatsumiN,TsudaL,FurotaA,HayashiM,MatsumotoH.Principleofbloodcellcounter-developmentofelectricimpedancemethod.SysmexJInt,1999,9:820.3BainBJ.Diagnosisfromthebloodsmear.NEnglJMed,2005.353(5):498507.4RuimyR,Armand-LefevreL,AndremontA.Shorttimetopositivityinbloodculturewithclusteredgram-positivecocciondirectsmearexaminationishighlypredictiveofStaphylococcusaureus.AmJInfectControl,2005,33(5):304306.5NadirE,KaufshteinM.Imagesinclinicalmedicine.Candidaalbicansinaperipheral-bloodsmea.NEnglJMed,2005,353(10):9.6BabeKS,ReinhardtJF.Diagnosisof1egionellasepsisbyexaminationofaperipheralbloodsmear.ClinInfectDis,1994,19(6):11641165.7MarksPW,ZukerbergLR.CaseRecordsoftheMassachusettsGeneralHospital.NEnglJMed,2004,351(13):13331341.8SimsKL.Peripheral-sinophiliaanddiagnosisofhypereosinophilicsyndrome.LabMed,2006,37:440442.9McPhersonRA,PincusMR.Henrysclinicaldiagnosisandmanagementbylaboratorymethods,21st.Philadelphia:SaundersElsevier,2007,468.10BarnesPW,McFaddenSL,MachinSJ,etal.TheinternationalconsensusgroupforhematologyreviewlsuggestedcriteriaforactionfollowingautomatedCBCandWBCdifferenti