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第十六章細胞死亡與細胞衰老一、判斷題1.細胞凋亡時,核小體間DNA斷裂直接由Caspase切割產(chǎn)生。()2.細胞質(zhì)膜破損、內(nèi)容物釋放以及細胞引起周圍組織出現(xiàn)炎癥等的細胞死亡形式就是細胞凋亡。()3.抑制細胞凋亡,可以增大小鼠體積。()4.細胞凋亡過程中,DNA被選擇性地切割形成DNA梯帶,而非完全降解。()5.對多細胞生物而言,細胞凋亡有助于個體正常發(fā)育。()6.蛙發(fā)育過程中尾巴的退化是通過細胞自噬實現(xiàn)的。()7.沒有Caspase的參與,細胞就不會凋亡。()8.Bcl-2是一個抑癌基因。()9.在很多動物細胞中,使用Caspase抑制劑或?qū)aspase敲除后,細胞雖然可以出現(xiàn)凋亡,但已經(jīng)不是程序性死亡形式了。()10.細胞壞死也有可能是程序性死亡形式。()11.細胞接受凋亡刺激信號后,線粒體除釋放Cytc外,還會釋放其他物質(zhì)。()12.細胞自噬就是同類細胞“吃掉”同類細胞。()13.通常細胞內(nèi)壽命較短的蛋白質(zhì)通過泛素-蛋白酶體系統(tǒng)降解,而壽命較長的蛋白質(zhì)則通過溶酶體降解。()14.植物細胞以及酵母細胞不發(fā)生程序性細胞死亡。()15.正常細胞都有一定的壽命,稱為Hayflick界限。()16.正常的體外培養(yǎng)的二倍體成纖維細胞只能進行有限次數(shù)分裂,其分裂增殖次數(shù)不僅與供體年齡有關(guān),還與物種壽命有關(guān)。()17.隨著傳代次數(shù)增加,體外培養(yǎng)的正常細胞群體中表達衰老相關(guān)β-半乳葡萄糖苷酶的細胞逐漸增多。()18.如果表達出有活性的端粒酶,增殖細胞的端粒將會逐漸變長()19.端粒的縮短會使細胞中的p53含量明顯增加。()二、分析與簡答題1.可用哪些方法檢測細胞凋亡,并簡要說明實驗依據(jù)?2.將細胞色素c(cytochromec)顯微注射到以下兩株細胞的細胞質(zhì)基質(zhì)中,一株是野生型,另一株是Bax和Bak基因缺陷型。請解釋這兩株細胞是否會凋亡(參考WeiMCetal.Science292,727~730)。3.Fas及Fas配體的一個重要作用是介導(dǎo)殺手淋巴細胞清除腫瘤細胞。研究發(fā)現(xiàn)不少原發(fā)肺癌和結(jié)腸癌細胞都能擴增并過量表達一種與Fas配體結(jié)合的分泌蛋白而存活下來。請解釋這種蛋白的過量表達為何能增強這些腫瘤細胞的生存能力(來源于Nature,1998,396,699-703)4.細胞死亡有凋亡(apoptosis)和壞死(necrosis)等不同類型。凋亡過程中,細胞質(zhì)膜完整、內(nèi)容物并不釋放到細胞外、形成凋亡小體;壞死過程中,細胞質(zhì)膜喪失完整性、內(nèi)容物釋放到細胞外、不形成凋亡小體等。已知熒光染料Hoechst33342能進入質(zhì)膜完整的細胞而與DNA特異結(jié)合顯示藍色熒光,而熒光染料碘化丙啶(PI)能穿過壞死細胞的質(zhì)膜與DNA結(jié)合顯示桔紅色熒光。試根據(jù)上述背景知識,簡單設(shè)計試驗區(qū)分正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞。5.細胞色素C(CytC)在細胞質(zhì)基質(zhì)翻譯后并不能誘導(dǎo)細胞凋亡,而當(dāng)其進入線粒體并從中釋放到細胞質(zhì)基質(zhì)后便能誘導(dǎo)細胞凋亡。有人認為可能原因是CytC進入線粒體后經(jīng)過了修飾變化,從而賦予其誘導(dǎo)細胞凋亡的功能,但也有人認為是因為CytC進入線粒體前經(jīng)過了糖基化等修飾的緣故。請你解釋哪種說法更有道理?!緟⒖即鸢浮恳?、判斷題1.×Caspase激活的核酸酶CAD在核小體間切割DNA2.×稱為細胞壞死3.×小鼠不能正常發(fā)育4.√5.√6.×是通過細胞凋亡實現(xiàn)的。7.×有Caspase非依賴性細胞凋亡途徑存在。8.×原癌基因9.×有Caspase非依賴性細胞凋亡途徑存在,且是程序性凋亡。10.√11.√12.×細胞自噬是細胞降解細胞自身物質(zhì)的過程。13.×都通過蛋白酶體降解14.×有程序性細胞死亡。15.√16.√17.√18.×端粒序列長度將維持在一定范圍內(nèi)19.√二、問答與分析1.答:從形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征,方法有:(1)形態(tài)學(xué)觀測:應(yīng)用各種染色體法可觀察到細胞的各種形態(tài)學(xué)特征。用熒光染料DAPI與DNA結(jié)合,可以觀察到細胞核的形態(tài)變化。(2)DNA電泳:細胞發(fā)生凋亡時,DNA在核小體間的斷裂產(chǎn)生180bp~200bp整倍數(shù)的片段。(3)彗星電泳法:凋亡細胞中形成的DNA降解片段,在電場中游動的速度較快,使細胞核呈現(xiàn)出一種簡便的凋亡檢測法。(4)流式細胞儀分析。2.答:兩株細胞都會凋亡,因為細胞色素C可以誘導(dǎo)細胞凋亡。3.答:過量表達的這種分泌蛋白與FasL結(jié)合后,可阻止細胞毒性T淋巴細胞分泌的FasL與腫瘤細胞表面的Fas結(jié)合,從而阻止了Fas受體介導(dǎo)的細胞凋亡信號途徑。4.答:方法:用Hoechst33342和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)對細胞進行雙重染色,然后用熒光顯微鏡觀察,可以區(qū)別凋亡、壞死及正常細胞。若有藍色
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