枯草芽孢桿菌發(fā)酵的實罐操作.ppt

1、枯草芽孢桿菌發(fā)酵的實罐操作,第三部分,枯草芽孢桿菌的實罐操作 實驗材料及儀器設(shè)備,10L-100L 二級發(fā)酵罐及其附屬設(shè)備 分光光度計 旋轉(zhuǎn)式搖床 離心機(jī) 水浴鍋 恒溫培養(yǎng)箱 超凈工作臺 全自動滅菌鍋 搖瓶 移液管 玻璃棒 燒杯 等玻璃儀器 試劑 牛肉膏 蛋白胨 氯化鈉 蒸餾水 氫氧化鈉 DNS試劑 1%淀粉,實訓(xùn)意義,生化工藝實訓(xùn)是為了讓學(xué)生掌握一定的生物化工工藝單元操作基本技能的基礎(chǔ)上進(jìn)行的一次綜合性實踐訓(xùn)練。主要對有機(jī)品發(fā)酵過程中常見的單元操作過程及設(shè)備進(jìn)行的基本操作技能訓(xùn)練。,防止染菌的要點,染菌是抗生素發(fā)酵的大敵，不制服染菌就不能實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。影響染菌的因素很多，而且?guī)щS機(jī)性質(zhì)，但只

2、要認(rèn)真對待，過細(xì)地工作，染菌是可以防止的。請到左邊的導(dǎo)航欄里選擇查看防止染菌的要點的內(nèi)容。,空氣系統(tǒng)的要求,防止空氣帶菌主要是提高空壓機(jī)進(jìn)口空氣的潔凈度，防止空氣夾帶油和水及空氣過濾器失效。 提高空壓機(jī)進(jìn)口空氣的潔凈度，可以從提高吸氣口的位置及加強(qiáng)空氣的壓縮前過濾著手。防止空氣夾帶油、水，除加強(qiáng)去除油、水的措施外，還必須防止空氣冷卻器漏水，注意勿使冷卻水壓力大于空氣壓力，防止冷卻水進(jìn)入空氣系統(tǒng)。,蒸汽系統(tǒng)的要求,重視飽和蒸汽的質(zhì)量，要嚴(yán)防蒸汽中夾帶大量冷凝水，防止蒸汽壓力大幅度波動，保證生產(chǎn)時所用的蒸汽壓力在3035千帕以上。,1、連續(xù)滅菌設(shè)備：連消塔結(jié)構(gòu)要求簡單，易于拆裝和清理，操作時蒸汽能

3、與物料混合均勻，并易于控制溫度。 2、發(fā)酵罐：發(fā)酵罐及其附屬設(shè)備應(yīng)注意嚴(yán)密和防止泄漏，避免形成“死角”。凡與物料、空氣、下水道連接的閥門都必須保證嚴(yán)密度。 3、無菌室：用超凈工作臺及凈化室代替無菌室，以提高無菌程度。,一、種子的制備,1.1種子的制備 1.2培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏 0.5g 蛋白胨 1g 氯化鈉 0.5g 蒸餾水 100ml PH 7.07.2 1.3將配置好的培養(yǎng)基放入250ml的三角瓶中裝液量為100ml。裝液后進(jìn)行高溫滅菌,1.4一級種子的制備 選取長勢良好的菌種，挑取菌落23環(huán)接種導(dǎo)液體搖瓶中。培養(yǎng)條件：180r/min，37攝氏度搖床過夜培養(yǎng)。

4、 1.5二級種子液的制備 將一級種子液接種到藥瓶培養(yǎng)基中接種量為5ml。培養(yǎng)條件：180r/min，37攝氏度搖床過夜培養(yǎng)。,二、發(fā)酵培養(yǎng)基配置,2.1發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏 0.5g 蛋白胨 1g 氯化鈉 0.5g 蒸餾水 100ml PH 7.07.2 2.2將發(fā)酵培養(yǎng)基按照上述配方比例配好共配培養(yǎng)基45L（由于滅菌過程中有產(chǎn)生大量冷凝水，所以去掉5L）。,三、空罐滅菌,3.1空氣過濾器滅菌，滅菌后對空氣過濾器通空氣進(jìn)行保壓，使壓強(qiáng)保持在0.10.15mpa之間防止染菌。 3.2對罐體進(jìn)行夾套預(yù)熱85攝氏度以上。 3.3溫度到達(dá)后，關(guān)閉夾套進(jìn)氣開關(guān)。通熱蒸汽對罐體經(jīng)行升溫，

5、當(dāng)溫度達(dá)到120攝氏度、壓強(qiáng)0.11mpa時，保持溫度和壓力20min。 3.4滅菌后，關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥，開大放氣閥，進(jìn)行泄壓。,四、實灌滅菌,4.1泄壓后，從進(jìn)料口開始添加培養(yǎng)基，并開始攪拌（轉(zhuǎn)速130r/min） 4.2進(jìn)料完畢后開始調(diào)節(jié)PH值 4.3調(diào)好PH后，對罐體進(jìn)行夾套預(yù)熱85攝氏度以上。 4.4溫度到達(dá)后，關(guān)閉夾套進(jìn)氣開關(guān)。通熱蒸汽對罐體經(jīng)行升溫，當(dāng)溫度達(dá)到120攝氏度、壓強(qiáng)0.11mpa時，保持溫度和壓力20min。 4.5滅菌后，關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥，開大放氣閥，當(dāng)壓強(qiáng)下降到0.08mpa時開啟通氣閥。使罐內(nèi)壓力保持在0.05mpa左右。 4.6開啟冷水閥門，對發(fā)酵罐進(jìn)行降溫。,五、

6、接種,5.1當(dāng)罐溫降到37攝氏度后，關(guān)閉冷水。用酒精將接種口處仔細(xì)擦洗，并放上接種火圈。 5.2減少進(jìn)氣，使罐壓保持在0.02mpa，點燃接種火圈。 5.3擰下進(jìn)料口螺蓋，放入酒精中。 5.4按接種瓶的瓶口在火焰上灼燒一下，并在火焰的保護(hù)下迅速，將菌種到入發(fā)酵罐。 5.5尋上進(jìn)料口螺蓋，熄滅火焰。并用酒精仔細(xì)清洗。,接種在無菌環(huán)境下進(jìn)行,六、發(fā)酵,6.1發(fā)酵條件：37攝氏度、壓強(qiáng)0.07kpa、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min 6. 2取樣：取樣前用熱蒸汽將出料口處進(jìn)行滅菌10min。 發(fā)酵參數(shù)的測定 1PH值的測定：用精確的PH試紙測。,2生長曲線：分光光度計波長600nm測od值（以相同稀釋倍數(shù)的培養(yǎng)基做空白）。以生長量為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)繪制生長曲線圖。 3淀粉酶活力的測定： 1.發(fā)酵液離心處理：8000rpm，5min 2.1ml離心后的發(fā)酵液+5ml 1%淀粉溶液與37攝氏度水浴5min終止反應(yīng)。 3.取上述溶液1ml，加入DNS試劑2.0ml于沸水浴中加熱2min進(jìn)行顯色，取出后用水迅速冷卻 ，加去9ml蒸餾水，搖勻，在540nm波長處測定吸光值。以1%淀粉溶液直接加熱煮沸再加DNS試劑反應(yīng)作為空白。,七、發(fā)酵過程中參數(shù)檢測結(jié)果,酶活曲線,菌濃曲線,八、實訓(xùn)結(jié)果總結(jié)及分析,經(jīng)指導(dǎo)老師后期提示才知實驗過程中空白試劑成分錯誤，造成試驗